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聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是分子生物学中基础且广泛应用的技术之一,用于特异性扩增目标DNA片段。尽管PCR仪和试剂是核心要素,但实验的顺利进行同样高度依赖一系列专用耗材。这些pcr耗材不仅影响反应效率和特异性,还直接关系到实验的重复性...
聚合物原料薄膜的发束重离子由离子源产生,然后由回旋加速器加速至高达4MeV/uma的能量。对于光束,聚合物薄膜在真空下通过扫描离子束以恒定速度解绕;因此,轨迹密度(或所需的孔密度)由离子束强度和薄膜速度精确定义。薄膜被拉过弯曲辊以增加轨道的角度展开,从而通过避免平行的双轨道来提高膜过滤器的选择性。束状聚合物薄膜的化学蚀刻在光束过程中产生的线性轨迹主要以大分子链断裂、高度亲水化学基团和自由真空为特征。因此,轨道比周围的本体聚合物对化学物质更敏感,并且可以选择性地蚀刻,导致它们暴...
凝胶过滤是分离金纳米粒子标记结合物的最佳方法。透析会产生更多变化的结果;在我们的实验室中,尝试通过透析将未结合的金纳米粒子与蛋白质和抗体结合物分离,导致金降解,有时还会导致蛋白质大量损失;因此,我们不推荐通过透析来分离偶联物。膜离心可能有用,特别是在标记非常大的蛋白质时;截留分子量为50,000或100,000的微量浓缩器将允许undecagold和Nanogold®穿过膜。选择您的凝胶过滤介质选择一种凝胶,它可以最好地分离金结合物和过量存在的组分:这将是一种凝胶,其...
纳米探针在制备用于标记DNA,RNA和其他核酸的金标记试剂方面具有持续的研究兴趣。MonoaminoNanogold,MonomaleimidoNanogold和Mono-sulfo-NHS-Nanogold®®®都可用于标记核苷酸。对纳米金®试剂的特定反应性必须首先掺入所需标记位点的核苷酸中。这可以通过三种方式实现:5'-用单氨基纳米金®标记(适用于所有寡核苷酸):首先,酶促去磷酸化5'末端。使用CDI(N,N'-羰基二咪唑)或EDC...
减少背景染色有两种方法:(a)在银增强之前和期间修改实验条件;或(b)改善银增强反应的“停止”或在完成后应用回显影。减少反应过程中的背景在使用荧光素和纳米金®探针FluoroNanogold的组合实验中,发现在银增强之前用0.02M柠檬酸钠缓冲液(pH7.0)洗涤,其背景明显低于许多其他处理。当使用Danscher银增强剂进行开发时,发现这是有效的。当纳米探针总部银色使用0.02M柠檬酸钠缓冲液在银增强前的pH3.5下给予较低的背景。在免疫印迹中,我们发现银增强前的0...
将凝胶过滤作为分离Nanogold®结合物的方法:这是我们实验室的常规使用方法,并且该方法已得到很好的表征。Nanogold®的分子量接近15,000,但由于其中很大一部分是由非常致密的金原子组成的,因此在许多基于大小的分离技术(例如凝胶过滤)中,Nanogold的表现就好像其MW更接近大约8,000。在计划您的标记反应时,您应该使用过量的成分,根据尺寸更容易与Nanogold®标记的产品分离。如果您的分子小于Nanogold®,您应该使用过量...
您的制剂中胶体金颗粒的浓度是多少,每个金颗粒结合多少抗体分子?通过对新鲜制备的不同尺寸的胶体金溶胶的光谱测量,我们计算了胶体金商业制剂中金颗粒的浓度。这些值假设用于制备的所有四氯金酸盐都转化为胶体金,并且金颗粒由密度为19.31克/mL的金属金组成:我们还计算了IgG分子和链霉亲和素的顶倍数,它们可以吸附到我们的金颗粒上。这些值基于IgG的接触面积为45nm2,以及25nm的链霉亲和素2,并假设IgG或链霉亲和素分子覆盖了金颗粒表面积的50%:请注意:这些值是基于假设的估计值...
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